Использование производственных жидкостей для диагностики вируса РРСС

Основание

В течение последних нескольких лет, совершенствование процедуры отбора образцов и техник диагностики облегчила задачу отбора образцов на ферме. Депонирование крови и использование слюны являются примерами такого усовершенствования. Тем не менее, ветеринары и производители всегда ищут более точные, дешевые и быстрые методы отбора образцов в поголовье. Одним из способов достижения этих целей может стать использование регулярных процедур, таких как кастрация и обрезание хвостов, являющихся частью обычной работы на свиноферме. Мы предлагаем использовать в качестве образца жидкости, накапливаемые на дне ковша, когда фермеры собирают хвосты и семенники во время соответствующих процедур. Целью данного исследования стала оценка точности производственных жидкостей с помощью ПЦР в реальном времени для определения статуса по вирусу репродуктивно-респираторного синдрома (РРСС).

Материалы и методы

Отбор образцов проводился после вспышки на ферме, которая до этого имела отрицательный статус. Были выбраны 10 пометов в неделю от групп с разным количеством опоросов, от которых были отобраны образцы при проведении соответствующих процедур (3 дня) в течение 8 недель. Пометы выбирали таким образом, чтобы иметь хорошее представление о месторасположении и количествах опоросов. У всех поросят из выбранных пометов были взяты и протестированы анализы крови, чтобы использовать эти данные в качестве стандарта при дальнейшем сравнении. Семенники и хвосты от каждого опороса были помещены в герметичный пакет. Ткани находятся в пакете, по меньшей мере, два часа. После этого, жидкость удаляют стерильной пипеткой и помещают в стерильную серологическую пробирку. И кровь и жидкости центрифугировали на ферме и перевозили в лабораторию в холодильнике. Все образцы тестировали с помощью ПЦР в реальном времени.

Фото 1. Собранные хвосты и семенники в герметичном пакете.

Результаты и обсуждение

Была составлена таблица 2х2 (таблица 1), сравнивающая статус сыворотки и жидкостей. Помет считался позитивным, если сыворотка хотя бы одного поросенка была позитивной. Позитивные результаты разделялись на категории на основе негативных пороговых значений (Ct), сниженных до 37,5 вместо принятых 40 Ct, для того, чтобы включить в анализы образцы, находящиеся в пограничном диапазоне от 35 до 40 Ct. Чувствительность (доверительный интервал 95%) и специфичность (доверительный интервал 95%) метода составляли 83% (63-95%) и 92% (82-98%) соответственно. Согласованность между обоими типами образцов хорошая (Каппа-частицы: 0.76 (доверительный интервал 95% : 0,53 – 0,98%). Было обнаружено 4 ложно-положительных и 4 ложно-отрицательных результата. Сыворотка поросенка в ложно-отрицательной группе была с низкой вирусной нагрузкой (высокое Ct), и когда они были разбавлены, их Ct перешел у отрицательный диапазон. Не смотря на то, что жидкости переносились с большой осторожностью, все же могло быть загрязнение, так как мы видим 4 ложно-положительных результата.

Наблюдалась статистическое расхождение (p<0,05) между % позитивных жидкостей при сравнении групп с небольшим количеством опоросов (первый и второй опорос) и групп с большим количеством опоросов (более двух опоросов), в группах с небольшим количеством опоросов процент позитивных животных был выше. Это соответствует результатам Cano и соавторов (2008) полученным при определении показателей риска, связанных с большей вероятностью определения ПЦР-положительных поросят.

Жидкости показывали положительные результаты даже когда всего лишь один поросенок в помете был позитивным, так как производственные жидкости являются очень точным инструментом для выявления того, что происходит в пометах и, соответственно, в поголовье. В тоже время эти результаты выявляют значимость сбора семенников и хвостов для сокращения распространения болезни. Кроме того, удалось восстановить и отследить вирус РРСС из образцов жидкостей.

Единственным ограничением данного исследования является то, что были представлены образцы только с одной фермы.

Конечно, эти результаты и применение данного метода может быть использовано только в странах, где разрешены кастрация и обрезание хвостов. В других регионах, где правила благополучия животных рекомендуют прижигание при обрезании хвостов необходимо дальнейшее исследования для выяснения возможностей использования этих образцов в качестве диагностического инструмента.

Таблица 1. Таблица 2х2, статус помета с использованием сыворотки в качестве стандарта для сравнения.

Вывод

Производственные жидкости являются эффективным образцом для определения вируса РРСС у поросят, даже после значительного времени, прошедшего после вспышки (6 месяцев), особенно в пометах с небольшим количеством опоросов. Другим итоговым выводом из полученных результатов является то, что семенники и хвосты должны быть собраны в ведро, так как они являются потенциальными распространителями РРСС в корпусе опороса.