0
Доступные анализы:
Следующий график показывает изменения концентрации (ось Y) с течением времени (ось X) различных аналитов, используемых в исследовании. После контакта, виремия начинается в течение 1 или 2 дней и длится 3-4 недели. Сероконверсия (выявление антител) обычно появляется спустя 14 дней после контакта и длится в течение многих месяцев или лет.
Фото 1. Схема обнаружения вирусов и антител, а также вариабельность вирулентности изолятов после воздействия АЧС. Источник: Справочная лаборатория Европейского союза по африканской чуме свиней.
Цепная полимеразная реакция (ПЦР)
- Выявляет наличие определенной последовательности нуклеиновых кислот (ДНК).
- Типы образцов: сыворотка, кровь или ткани.
- Преимущества:
-
- Наиболее чувствительный и предпочитаемый метод выявления агента
- Moderate cost
- Зачастую можно объединять несколько образцов для снижения стоимости, при этом снижение чувствительности минимальное
- Недостатки:
- Требуются надлежащие праймеры
Реакция гемадсорбции (HAT)
- Выявляет наличие вируса путем прикрепления эритроцитов к внешней цитоплазматической мембране макрофагов свиней, зараженных вирусом АЧС.
- Тип образца: сыворотка или плазма
- Преимущества:
- Один из стандартных референтных тестов
- Недостатки:
- Несколько полевых штаммов не вызывают гематсорбцию, а негативные результаты обычно требуют подтверждения через ПЦР
Твердофазный иммуноферментный анализ на выявление антигена (Ag-ELISA)
- Выявляет наличие агента
- Типы образцов: обычно кровь и возможно другие специфические ткани (нужно следовать рекомендациям набора)
- Преимущества:
- Доступный коммерческий набор
- Относительно недорогой
- Недостатки:
- Чувствительность намного ниже, чем у ПЦР
- Объединение образцов не рекомендуется
- Отрицательные результаты обычно требуют подтверждения через ПЦР тест
Твердофазный иммуноферментный анализ на выявление антитела (Ab-ELISA)
- Выявляет наличие антител
- Типы образцов: сыворотка или плазма
- Преимущества:
-
- Животные остаются положительными в течение нескольких месяцев или лет
- Можно использовать в хронических случаях
- Может быть использовано в низко-вирулентных/субклинических случаях
- Сероконверсия может появиться через 7-10 дней
- На текущий момент отсутствуют коммерческие вакцины, которые затрудняли бы интерпретацию положительных результатов
- Недостатки:
- Животным требуется 7-10 дней, чтобы стать сероположительными
- Невозможно различить материнские антитела от контактных
Непрямое флуоресцентное антитело (IFA)
- Выявляет наличие антител
- Типы образцов: сыворотка или плазма
- Преимущества:
- Подтверждающий тест для неожиданных положительных по ELISA образцов
- Недостатки:
- Животные должны быть уже инфицированы, по крайней мере, 1 неделю
- Не практичен для большого количества образцов
- Результаты, на которые повлиял изолят вируса, использованный для исследования
- Надежность сильно зависит от навыков
Фото 2. Диаграмма, демонстрирующая использование IFA для подтверждения АЧС при неожиданно положительном тесте ELISA. Отрицательный образец, протестированный с помощью ELISA как отрицательный рассматривается как отрицательный. Если данный образец неожиданно тестируется положительно, тогда используется IFA, как подтверждающий. Если тест IFA положительный, тогда образец подтверждается как положительный. Если IFA тест отрицательный, тогда считаем, что это был ложно-положительный тест с учетом ,что ПЦР тест также является отрицательным.
Непрямой иммунопероксидазный метод (IPT)
- Выявление наличия антител
- Типы образцов: сыворотка или плазма
- Преимущества:
- Подтверждающий тест для неожиданных положительных по ELISA образцов
- Недостатки:
- Животные должны быть уже инфицированы, по крайней мере, 1 неделю
- Не практичен для большого количества образцов
- Результаты, на которые повлиял изолят вируса, использованный для исследования
- Надежность сильно зависит от навыков
Фото 3. Диаграмма, демонстрирующая использование IPT для подтверждения АЧС при неожиданно положительном тесте ELISA. Отрицательный образец, протестированный с помощью ELISA как отрицательный рассматривается как отрицательный. Если данный образец неожиданно тестируется положительно, тогда используется IPT, как подтверждающий. Если тест IPT положительный, тогда образец подтверждается как положительный. Если IPT тест отрицательный, тогда считаем, что это был ложно-положительный тест с учетом ,что ПЦР тест также является отрицательным.
Интерпретация результатов:
Зачастую требуется несколько анализов для предоставления более точной интерпретации диагностики АЧС.
Таблица 1. Интерпретация результатов диагностики АЧС. Источник: Референтная лаборатория ЕС по АЧС
| Анализ | Результат | Наиболее вероятный сценарий |
|---|---|---|
| ПЦР | Слабый (Ct>35) | Животное было недовно инфицировано, сероконверсия еще не произошла (< 7 дней). Клинические признаки могут быть неочевидны. |
| Ab-ELISA | Отрицательный | |
| IPT | Отрицательный | |
| ПЦР | Положительный | Животное недавно было инфицировано, развитие клинических признаков и начало сероконверсии (7-10 дней) |
| Ab-ELISA | Отрицательный | |
| IPT | Положительный | |
| ПЦР | Положительный |
a) Инфекция в процессе. Животное все еще виремично, присутствуют клинические признаки, сероконверсия произошла (>10 дней) b) Повторное инфицирование животного предварительно сформированными антителами предыдущей инфекции (выздоровевшая, выжившая свинья). |
| Ab-ELISA | Положительный | |
| IPT | Положительный | |
| ПЦР | Слабый (Ct>35) или Отрицательный |
a) Инфекция прошла. Животное восстановилось после острой или подострой формы инфекции и не выказывает клинических признаков. b) Животное было инфицировано ослабленным штаммом (с или без клинических признаков). c) Повторное инфицирование животного предварительно сформированными антителами предыдущей инфекции (выздоровевшая, выжившая свинья). |
| Ab-ELISA | Положительный | |
| IPT | Положительный |
ПЦР
- Положительный: Вирус присутствует; текущая инфекция
- Отрицательный: Отрицательный или вирус могли пропустить, если тестирование проводилось спустя длительное время после инфекции.
Реакция гемадсорбции (HAT)
- Положительный: Вирус присутствует; текущая инфекция
- Отрицательный: Отрицательный, инфекция негемадсорбционным изолятом или вирус могли пропустить, если тестирование проводилось спустя длительное время после инфекции. Негативный результат должен быть подтвержден ПЦР.
Твердофазный иммуноферментный анализ на выявление антигена (Ag-ELISA)
- Положительный: Вирус присутствует; текущая инфекция
- Отрицательный: вирус присутствует, но в низких концентрациях или могли пропустить, если тестирование проводилось спустя длительное время после инфекции. Негативный результат должен быть подтвержден ПЦР.
Твердофазный иммуноферментный анализ на выявление антитела (Ab-ELISA)
- Положительный: Материнские антитела или после контакта (>7-10 дней) с диким вирусом.
- Отрицательный: Отрицательный или прошло слишком мало времени после инфицирования диким типом вируса
Непрямое флуоресцентное антитело (IFA)
- Положительный: Материнские антитела или после контакта (>7-10 дней) с диким вирусом.
- Отрицательный: Отрицательный или прошло слишком мало времени после инфицирования диким типом вируса
Непрямой иммунопероксидазный метод (IPT)
- Положительный: Материнские антитела или после контакта (>7-10 дней) с диким вирусом.
- Отрицательный: Отрицательный или прошло слишком мало времени после инфицирования диким типом вируса
Сценарии
Важно отметить, что некоторые страны могут попросить согласование федеральными властями перед любым тестированием на АЧС.
Подозрение на острую вспышку АЧС у свиней в любом возрасте
- Отберите кровь от большого количества пораженных животных и сделайте тест ПЦР; можно рассмотреть объединение нескольких образцов.
- Отберите селезенки и миндалины у мертвых свиней и проверьте ПЦР-тестом; можно объединить образцы.
Фото 1. Отбор образцов при подозрении на АЧС. Фото предоставлено д-ом Надеждой Коноваловой
Подозрение на хроническую форму АЧС, циркулирующую у свиней в любом возрасте с отсутствием смертности.
- Отберите кровь от 30 свиней с клиническими признаками (таргетированный отбор) или рандомно (отсутствие клинических признаков) и проверьте ПЦР-тестом (можно объединить образцы) и проверьте каждый образец с помощью Ab-ELISA
