0
Клостридий перфрингенс типа А входит в естественный состав микробиоты нижней части тонкого кишечника и толстой кишки у свиней и у многих других видов животных. Диагностирование клостридия перфрингенс типа А увеличило количество неонатальных случаев диареи у поросят в течение последних десяти лет. Тем не менее, достоверная роль этой бактерии в качестве первичного агента диареи у поросят - сосунков не полностью известна. Основной проблемой правильной интерпретации роли клостридия перфрингенс типа А в случаях диареи у новорожденных поросят была сложность генома, чтобы поставить заключительный диагноз. Эта сторона будет в центре внимания настоящего обсуждения.
В научной литературе описаны случаи клинические проявления клостридия перфрингенс типа А, когда у поросят развивается диарея с кремообразной или пастообразной консистенцией через два дня после рождения, что может продолжаться до пяти дней. Кал иногда может стать слизистым. Смертность обычно не наблюдается, но поражённые животные имеют тенденцию к задержке в развитии по сравнению с незаражёнными ровесниками, и, следовательно, ставят под угрозу набор нужного веса при отъёме. Не существует чёткого отличительного признака наличия клостридия перфрингенс типа А при проведении аутопсии, чтобы его можно было отличить от других возможных энтеропатогенов, найденных у животных этого возраста. Гистологически может иметь место поверхностный некроз кончиков ворсинок, связанный с накоплением фибрина. Поражение, связанное с интенсивным образованием колоний палочковидных бактерий в тесной связи с травмированными энтероцитами, могло бы говорить в пользу диагноза клостридия перфрингенс типа А (рис. 1). Однако такие результаты редко можно увидеть. Чаще всего, никаких микроскопических поражений не наблюдается, что вызвало предположение, что эта бактериальная инфекция может вызвать секреторную диарею. Эта вероятность никогда не подтверждалась.
Рисунок 1. Тонкий кишечник поросёнка с диареей, ассоциируемой с инфекцией клостридий перфрингенс типа А. Большое количество палочкообразных бактерий в тесном контакте с энтероцитами (100х). Источник: Профессор Джеймс Коллинз, Университет Миннесоты, США
Окрашивание по Граму выглядит одинаково для всех типов клостридий перфрингенс со стороны колоний бактерий и бета - гемолиза в кровяном агаре. Единственный способ, чтобы дифференцировать пять типов клостридий перфрингенс от А до Е, основан на выработке четырёх основных токсинов: альфа, бета, эпсилон и йота. Существуют также и другие два важных токсина, энтеротоксин и бета-2, которые должны быть упомянуты. Все типы клостридий перфрингенс могут быть найдены в желудочно - кишечном тракте поросят, но только типы А и С считаются патогенными для этого возраста поросят. Существует очень высокая корреляция между обнаружением кодирующих генов этих токсинов cpa, cpb, etx, ia, cpe и cpb2 (табл. 1), соответственно, и их проявления, а это означает, что обнаружение этих генов методом ПЦР будет представляться таким же, как и обнаружение токсина в кале. Все типы клостридий перфрингенс имеют ген cpa. Обнаружение cpa и cpb могло бы определить такие бактерии, как тип C, в то время как только обнаружение cpa могло бы определить такие бактерии, как тип А.
Таблица 1. Определение типов клостридий перфрингенс, основанное на выработке токсинов
|
Тип клостридий перфрингенс |
Альфа |
Бета |
Эпсилон |
Йота |
Энтеротоксин |
Бета-2 |
| A | X | X | X | |||
| B | X | X | X | X | ||
| C | X | X | X | X | ||
| D | X | X | X | |||
| E | X | X | X |
Количественный анализ клостридий перфрингенс типа А в фекалиях имел обыкновение быть возможным признаком корреляции с диареей. Другими словами, бурный рост клостридий перфрингенс типа А в пробах первичного посева настоятельно указывает на его связь с диареей. Тем не менее, различные исследования показали, что не существует достаточных доказательств того, что этот количественный анализ может быть использован в качестве пробирного анализа для диагностики инфекции клостридия перфрингенс типа А, связанной с поносом у поросят.
Так как клостридий перфрингенс типа А входит в естественный состав кишечной микробиоты поросят, то в течение многих лет выработка токсина бета-2 или наличие гена cpb2 из-за некоторых штаммов клостридий перфрингенс типа А, считались окончательными показателями патогенности. Как результат, окончательная лабораторная диагностика была основана на обнаружении токсина бета-2 в фекалиях с помощью ИФА или путём выделения возбудителя и типизации колоний с помощью мультиплексной ПЦР на наличие генов cpa и cpb2. Тем не менее, по крайней мере, три различных исследования, включая исследование нашей группы, показали, что тестирование путём мультиплексной ПЦР колоний клостридий перфрингенс, выделенных из диарейных и нормальных поросят, обнаружило больше генов cpb2, положительных на клостридий перфрингенс, у нормальных, чем у больных поросят. К сожалению, эти данные ясно показывают, что нет какого-либо доступного точного анализа, который может обнаруживать или идентифицировать патогенные штаммы клостридий перфрингенс типа А. Я действительно полагаю, что некоторые штаммы этой бактерии являются патогенными для поросят и могут вызвать диарею и пониженные темпы прироста; тем не менее, мы еще не знаем, как определить их! Конечно, это условие ставит огромную проблему в борьбе с болезнью, так как окончательный диагноз основывается только на «последних остатках возбудителя, доступных для анализа». Намного больше работы должно быть проделано для того, чтобы определить возможный индикатор патогенности клостридия перфрингенс типа А.