Знакомство с фермой
Это кооператив, у которого 2 производственных модуля поросят (ПМП) и центр искусственного осеменения (ЦИО), расположенные в штате Парана (Бразилия). Производственные модули расположены в 60 км друг от друга, а ЦИО в 35 км от ПМП 1 и в 60 км от ПМП 2 (рис. 1).
Рисунок 1. Расстояние между фермерскими производственными модулями поросят и центром искусственного осеменения.
В марте 2011 года составлен отчет руководителей обоих ПМП, который отразил увеличение отторжений у самок (от 17 до 28 дней, супоросных и ремонтных, с частотой отторжений в 22%) со слизистыми от белого до коричневого (шоколадного) вулговагинальными выделениями спустя несколько часов после искусственного осеменения. Наиболее высокий уровень заболеваемости произошел у ремонтных свинок, но это также затронуло повторнородящих свиноматок. Свиноматки после отъёма поросят находятся в боксах с контролируемой температурой 21°C и относительной влажностью воздуха 60 - 70%, и содержатся на той же территории, по крайней мере, в первые 7 - 8 недель беременности.
Эта проблема возникла на двух фермах. Для мер биологической безопасности сначала был нанесён визит в ЦИО, а затем в оба ПМП согласно протоколам консалтинговой фирмы. Первые клинические подозрения, возникли с наличием микотоксинов, так что компания - производитель кормов взяла пробы, провела наблюдения и дала количественную оценку. Они ничего не нашли в сырье.
Состояние здоровья
На обоих ПМП животные показали негативную серотологическую реакцию на вирус свиного репродуктивного и респираторного синдрома и на вирус Ауэски, но положительную реакцию в отношении микоплазменной пневмонии. Были предприняты соответствующие меры биологической безопасности, которые обеспечивают хороший контроль заболеваемости с низкой степенью клинических признаков, указывающих на наличие острых или хронических заболеваний.
Пополнение на коммерческих фермах начинается с приобретения отъемышей чистокровных разнопородных самок от производителя, который имеет своих собственных прапрародителей и свиноматок во втором поколении, и получения генетического материала, который соответствует основам генетического улучшения, производится путем приобретения семени хряка второго и третьего поколения по существующей программе. ЦИО компании производит 7,500 доз в месяц.
Центр искусственного осеменения
ЦИО является современным и полуавтоматизированным, использующим отходы в производственных процессах. Хряки свободны от антител вирусов свиного репродуктивного и респираторного синдрома, Ауэски, лептоспироза, бруцеллёз, и прививаются каждые 6 месяцев против свиной краснухи, лептоспироза и парвовирусов. Они размещаются в 7,5 - метровом загоне с заданной температурой в 21°C (диапазон между максимумом и минимумом 4 - 6°C), с относительной влажностью 60-70% и 12 – 14 - часовым освещением.
В манеже для взятия спермы есть сточная впадина и лабораторные секции, которые соответствующим образом разделены на чистую, грязную и промежуточную зоны. В самой лаборатории используется вода, добываемая при помощи установки обратного осмоса с целью производства доз. Все оборудование – это нержавеющая сталь, одноразовые материалы, используемые для обработки спермы. Дозы упаковываются автоматически в пластиковые трубки.
Экскурсия на производственный объект
В ходе визита в ЦИО были взяты пробы воды, чистой и разбавленной спермы, а также материалы, которые являются частью производства и распределения доз семени, как показано в таблице 1, с соответствующими результатами.
Таблица 1. Бактериология.
Проба |
UFC/мл – Возбудитель |
Вода, недавно прошедшая через установку обратного осмоса |
Нет культивирования |
Вода, собранная из гомогенизатора с разбавителями |
36 КОЕ |
Вода с разбавителями на пластинках для микробиологического анализа |
Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia |
Вода с разбавителями |
Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia |
Баллон гомогенизатора / Спираль |
Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia |
Пробирка для сбора образцов – Блистер |
Нет культивирования |
Контейнер для дозатора |
Нет культивирования |
Поилка |
10 КОЕ |
Наконечник дозатора |
Нет культивирования |
(КОЕ) колониеобразующие единицы
Таблица 2. Бактериология в разбавленной сперме
Проба |
Выделенный возбудитель |
Разбавленная сперма - 1 |
Burkholderia cepacia |
Разбавленная сперма - 2 |
Burkholderia cepacia |
Разбавленная сперма -3 |
Burkholderia cepacia |
Разбавленная сперма - 4 |
Burkholderia cepacia |
Результаты
Таким образом, было проверено, что имело место предшествующее заражение в резервуаре гомогенизатора (в спирали и одноразовом пластиковом обёрточном мешке резервуара). Заражение также было установлено в дозах, производимых в это же время, из - за высокого сосредоточения в резервуаре (пластиковый мешок и пропеллер) того же вида штамма бактерий, что и в ёмкости для разбавления.
1-е Заключение: Одноразовый пластиковый пакет резервуара обновлялся всего раз в неделю. Рекомендуется замена всех одноразовых материалов после производства каждой дозы.
Посещение фермы (ПМП 1)
В ходе посещения ПМП 1 были взяты пробы из первой мочи, отбрасывая первые капли и собирая только среднюю порцию в стерильные контейнеры и поддерживая основные гигиенические меры предосторожности на протяжении всей процедуры. Материал был немедленно подготовлен и был охлаждённым направлен для лабораторной обработки.
Было отмечено, что 15% проб мочи показали бактериальную культуру Burkholderia cepacia. Это бактерия, которая часто встречается в почве, воде и может жить в течение длительного времени в условиях повышенной влажности. Некоторые исследования связывают наличие Burkholderia cepacia для людей с муковисцидозом, наличествующим в респираторных заболеваниях.
Также ремонтная свинка с обильным присутствием вульвовагинального секрета была выбрана таким образом, что в клинической оценки все параметры показали нормальное физиологическое состояние без признаков потери аппетита или лихорадки (ректальная температура была 38.7°C). Единственным клиническим наблюдением было наличие слизи и наличие уретральных нитей, и гиперемии в слизистой влагалища. Свиноматка была недавно оплодотворена (получили первую дозу спермы в течение утра и продолжали собирать пробы в конце дня).
Рисунок 1. На снимках показаны влагалищные секреции.
Были взяты мазки секреций для определения бактерий. Результаты показаны в следующей таблице:
Таблица 3. Результаты бактериального выделения.
Проба |
Выделенный возбудитель |
Слизистая влагалища |
Культивирование и выделение Burkholderia cepacia |
Слизистая шейки матки |
Культивирование и выделение Burkholderia cepacia |
Слизистая оболочка матки |
Культивирование и выделение Burkholderia cepacia |
Слизистая оболочка мочевого пузыря |
Нет культивирования |
Рисунок 2. Воспроизводительный тракт ремонтной свинки. |
Рисунок 3. Раскрывание шейки матки для сбора секрета мазком. |
Рисунок Наличие слизи в слизистой шейки матки и в слизистой оболочке матки.
|
Другие недавно осеменённые самки с теми же клиническими симптомами были выбраны для сбора мазков вульвовагинальных секреций с использованием одноразовых расширителей для лучшего открывания слизистой влагалища и глубокого проникновения мазка. Мы выбрали первородящих самок с одинаковыми клиническими признаками и завершённым осеменением, чтобы отправить их на убой и подвергнуть некропсии. Мы полностью извлекли половой проток и, вскрыв его, взяли пробы гнойной слизи из шейки матки, влагалища и рога матки для получения бактериальной культуры.
2-е Заключение: IВо всех собранных материалах для получения бактерий был обнаружен тот же вид бактерий: Burkholderia cepacia.
Управленческие стратегии, которые были предприняты:
- Прибегая к лекарственному лечению, использовать инъекции цефтиофура для свиноматок с проблемами;
- Отказаться от использования свиноматок, у которых наблюдаются повторы с выделениями;
- Принять процедуру автоклавирования всех загрязненных лабораторных материалов;
- Использовать одноразовый мешок в ёмкости для разбавления каждый день.
- Увеличить медицинский контроль основного персонала и лабораторных средств, начать использовать одноразовые маски при подготовке доз семени;
- Посещение центра и ферм каждые 15 дней, собирая материал на всех стадиях производственного процесса семени, пока не восстановятся нормальные условия;
- Избегать хранения доз спермы более чем 72 часа;
- Проблема была решена в лаборатории в течение трёх недель, но потери продолжались 10 недель.
Растворитель, который использовался, содержал антибиотики, но бактерии были устойчивы, как показано в антибиограмме, и, как показано в следующей таблице. Также было предложено добавление к разбавителям антимикробных молекул, чувствительных к B. cepacia.
Таблица 4. Антибиограмма - RG 131
Антибиотики |
Burkholderia cepacia (вода с разбавителем) |
Burkholderia cepacia (сперма разбавлена на 88645) |
||
Зона подавления |
Чувствительность |
Зона подавления |
Чувствительность | |
Амоксициллин 10 мкг |
6 мм | С | 6 мм | С |
Ампициллин 10 мкг |
6 мм | С | 6 мм | С |
Апрамицин 15 мкг |
16 мм | Ч | 16 мм | Ч |
Цефтиофур 30 мкг |
26 мм | Ч | 26 мм | Ч |
Колистин 10 мкг |
6 мм | С | 6 мм | С |
Энрофлоксацин 5 мкг |
26 мм | Ч | 26 мм | Ч |
Спектиномицин + Линкомицин 100+9 мкг |
14 мм | С | 14 мм | С |
Флорфеникол 30 мкг |
16 мм | П | 16 мм | П |
Гентамицин 10 мкг |
6 мм | С | 6 мм | С |
Неомицин 30 мкг |
6 мм | С | 6 mm | С |
Норфлоксацин 10 мкг |
>30 мм | Ч | >30 мм | Ч |
Пенициллин G 10 мкм |
6 мм | С | 6 мм | С |
Сульфазотрим 25 мкг (Сульмафетацин+Триметропим) |
6 мм | С | 6 мм | С |
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: S = Чувствительный, R = Стойкий, I = Промежуточный
Метод: диффузия в агаре
Ссылка: ИКЛС (Институт клинических и лабораторных стандартов)